Mi az ELISA vérvizsgálata

A modern orvostudomány fejlődése a diagnosztika világában soha nem szűnik meg csodálkozni az elért eredményeivel, és most az orvosnak nem kell feltételezéseket tennie a valószínű diagnózisról, csak közvetett jelekre támaszkodva. Az enzimhez kapcsolt immunszorbens assay (ELISA) laboratóriumi kutatásának létrehozása és bevezetése a világba lehetővé teszi, hogy gyorsan és pontosan meghatározza nemcsak a kórokozó jelenlétét, hanem a betegség számos egyéb jellemzőjét is.

Az IFA létrehozásának és fejlődésének története

Ezt a vérvizsgálati módszert még a múlt század közepén kezdték alkalmazni a gyakorlati orvostudományban - valahol a 60-as években. Kezdeti célja tudományos kutatás volt a szövettan területén, amely csak a biológiai fajok sejtes antigénszerkezetének kutatására és tanulmányozására korlátozódott. Az ELISA módszerrel végzett vérvizsgálat a rokon antigének (AG) és a specifikus antitestek (AT) kölcsönhatásán alapul, az enzim által meghatározott "antigén-antitest" komplex képződésével..

Ez a jelenség arra késztette a tudósokat, hogy döntsenek arról, hogy a módszer felhasználható a vérszérumban képződő különböző osztályú fehérje-vegyületek felismerésére, amikor egy kórokozó bejut a szervezetbe. Az immunrendszer működésében való közvetlen részvételük miatt ezeket a vegyületeket immunglobulinoknak (Ig, Ig) nevezik, és a felfedezés volt a legnagyobb áttörés a laboratóriumi diagnosztikában..

Ugyanakkor ezt a rendkívül érzékeny módszert csak a 80-as években kezdték aktívan alkalmazni, és csak a magasan specializált orvosi intézményekben volt elérhető. A legelső az enzim immunanalízist használhatta állomásokon és vérátömlesztési központokban, nemi és fertőző egészségügyi intézményekben. Ennek oka a "20. századi pestis" - AIDS - gyors terjedése volt, és sürgős diagnosztikai és terápiás intézkedésekre volt szükség..

A technika lehetőségei

Az ELISA vérvizsgálatának alkalmazási területe meglehetősen széles - jelenleg nem lehet elképzelni, mennyire bonyolult lenne sok betegség okának felkutatása. Az ilyen kutatásokat ma szinte az összes orvosi területen alkalmazzák, még az onkológiában is. Noha a tájékozatlanok számára nehéz megérteni, egyes esetekben, miután végrehajtották, sikerült megmenteni a betegek életét, mivel a daganatot már a korai szakaszban felfedezték..

A modern diagnosztikai központokban a laboratóriumi vizsgálatokat nemcsak daganatmarkerek képviselik - ezek a panelek lenyűgöző arzenáljával vannak ellátva ennek a diagnózisnak a végrehajtásához. Segítségükkel számos kóros állapot meghatározható, például hormonális rendellenességek és különböző eredetű fertőző folyamatok..

Ezenkívül az ELISA vérvizsgálat elvégzése és dekódolása lehetővé teszi a gyógyszerek hatásának nyomon követését egy beteg ember, sőt egy állat testére is. Ez utóbbit széles körben alkalmazzák az állatorvosi klinikákon, elősegítve háziállataink vagy kenyérkeresőink egészségének fenntartását, stabil étrendben pótolhatatlan hús-, tejtermék- és tojástartalmat biztosítva..

Tehát csak néhány milliliter vénás vér felvétele és annak ELISA módszerrel történő diagnosztizálása eredményeként az orvos, miután leírta a kutatási anyagokat, képes lesz meghatározni:

  • hormonális állapot, ideértve az ivarmirigyek és a pajzsmirigy, valamint a mellékvesék biológiailag aktív anyagait;
  • bakteriális és vírusos fertőzések (hepatitis B és C, szifilisz, herpesz, chlamydia, tuberkulózis, myco- és ureaplasmosis, HIV, TORCH) és más ilyen jellegű betegségek jelenléte;
  • a kóros folyamat kórokozóinak létfontosságú aktivitásának jelei, amelyek gyógyulással végződtek és átjutottak az antitestképződés szakaszába (immunválasz).

Az ilyen komplexeket sokkal könnyebb felismerni és eltávolítani az immunsejtek által. Az antitestek formájában fennmaradó többszörös hatásokat a vér egész életen át tartalmazza, ami gyakorlatilag nullára csökkenti az újrafertőződés kockázatát.

Az immunglobulinok fajtái

Az antitesteknek több típusa létezik, és mindegyik részt vesz az immunválasz folyamatában egy bizonyos szakaszban. Például az M osztályú immunglobulinok (IgM) képződnek elsőként a magas vérnyomás testbe történő bejutására reagálva. Legmagasabb arányuk a betegség első napjaiban figyelhető meg..

Ezután az immunrendszer G Ig osztályt (IgG) indít a plazmába, amelyek felelősek az antigének teljes elpusztításáért és a beteg gyógyulásáért. Később továbbra is a vérben vannak, előkészítve ezzel az immunitást az azonos kórokozó ismételt elütésére. Az oltás így működik. A kóros mikroorganizmusok legyengült antigénjeinek bevezetésével sok immunglobulin jelenik meg és kering a plazmában.

És később, ha kórokozó érintkezés történik, gyorsan megbirkóznak a fertőzéssel, megmentve a testet az egészségügyi veszélyektől. Az IgA nagy mennyiségben koncentrálódik a nyálkahártyákban, megakadályozva a patogén vírusok és baktériumok bejutását a szervezetbe. Az IgE felelős a parazita fertőzések elpusztításáért, és sok más immunglobulin is részt vesz az immunválaszban.

A laboratóriumi diagnosztika fő érdeklődésének tárgya az M, G és A. Ig osztály. Koncentrációjuk szintje alapján meghatározhatja a betegség stádiumát, és megtudhatja, hogy az ember milyen fertőző betegségeket szenvedett életében. Például ellenőrizheti, hogy volt-e bárányhimlő vagy rubeola. Az orvosnak nem szükséges több laboratóriumi vizsgálatot előírnia ahhoz, hogy kiderüljön, van-e egy bizonyos típusú AT vagy AH a beteg testében, vagy van-e bármilyen hormon koncentrációja - elég, ha beutalót ír az ELISA-hoz..

A technika lényege

Paraziták és más mikroorganizmusok enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálata - a test egészségének károsítói nemcsak a kórokozók jelenlétének megállapítását teszik lehetővé, hanem a beteg vérplazmájában való számukról is. Így egy ilyen vizsgálat lehetővé teszi a szérum anyagában található patogén mikroorganizmusok kvalitatív és kvantitatív elemzését..

A kórokozó koncentrációjának szintje jelentősen befolyásolja a fertőzés kialakulását és a gyógyulás sebességét, ezért a minőségi értékelést nem kevésbé fontosnak tekintik, mint egy mennyiségi értékelést. Korántsem kapta meg az utolsó szerepet mind a gyermekek, mind a felnőttek kezelésében. De hogyan lehetséges, hogy az ELISA képes felismerni az emberek és állatok testében parazitáló mikroorganizmusok ilyen széles körét, kárt okozva és csökkentve az életminőséget??

A kutatási módszertan a kijelölt feladatok elvégzésének több lehetőségén (közvetlen és közvetett - versenyképes és nem versenyképes) alapul, amelyek mindegyike meghatározott célokat szolgál. Ez a megközelítés lehetővé teszi a célzott keresést, és a lehető legrövidebb idő alatt azonosítja az adott patológia okát. A különböző osztálykategóriákba tartozó Ig kimutatásához egy 96 lyukú lemezt (polisztirol panel) használnak, és a lyukakban sorbált rekombináns fehérjék találhatók. Az antigének szerepét töltik be, és a kezdeti szakaszban szilárd fázisban vannak.

Amikor a vérplazmával a kútba kerül, az antigének vagy antitestek azonosítják az objektumot az orientációjukkal összefüggésben, és komplexet alkotnak (AG - AT). Ezt a képződést egy enzimvegyület (konjugátum) rögzíti, amely később a kút megváltozott színeként nyilvánul meg. Az ELISA-t speciális tesztrendszereken állítják elő, amelyeket speciális laboratóriumokban gyártanak és teljes reagenskészlettel látnak el.

Ez az elemzés elvégezhető alátéteken - alátéteken és spektrofotométer-leolvasásokon, de ezek kézi munkát igényelnek. Természetesen egy laboratóriumi asszisztensnek többször kényelmesebb és gyorsabb az összes manipulációt teljesen automatizált eszközökön végrehajtani. Használatuk során a laboratóriumi személyzet megszabadul a nagy mennyiségű monoton tevékenységtől - mosás, csepegtetés és a többi rutin, de nem minden orvosi intézmény engedheti meg magának ilyen drága berendezéseket

A kutatási anyagok értelmezése kizárólag a laboratóriumi diagnosztikus kompetenciájába tartozik - az eredményeket csak neki lehet elmondani a betegség lefolyásának sajátosságairól és finomságairól. Ebben az esetben az orvosnak figyelembe kell vennie a hamis negatív vagy hamis pozitív válaszok megszerzésének lehetőségét..

Anyagok dekódolása

A kiváló minőségű enzim immunvizsgálat eredményének egyértelmű következtetésnek kell lennie - a kívánt mikroorganizmust ebben a vérmintában találták vagy sem. A kvantitatív elemzés megmutatja a koncentráció szintjét, és kétféleképpen fejezhető ki - számokban kifejezett érték vagy a "+" jelek száma alapján.

Elemzett mutatók

A kutatás során gondosan tanulmányozzák az immunválaszban részt vevő főbb immunglobulinokat, például:

  • IgM - ennek az osztálynak a kimutatása a fertőző betegség akut formájának kialakulását jelenti. Az IgM keresésének negatív eredménye lehet mind a kívánt kórokozó hiányának, mind a betegség krónikus lefolyásba való átmenetének bizonyítéka..
  • IgA - ennek az osztálynak a meghatározása IgM hiányában, a legtöbb esetben egy fertőző betegség krónikus vagy látens formájának jele.
  • IgM és IgA (egyidejű jelenlét) - mindkét típus pozitív eredménye a patológia akut formájának csúcspontját jelzi.
  • IgG - jelenléte azt jelzi, hogy a betegség krónikus formává alakul vagy helyreáll, és a meghatározandó szerrel szembeni immunitás kialakulását jelzi.

Az IS bizonyos osztályának megjelenése és felhalmozódása különböző időszakokban történik. Tehát például az IgM jelenik meg először, körülbelül 5 nappal a kórokozó elütése után. Az IG-k körülbelül 5-6 hétig maradnak a vérben, majd fokozatosan eltűnnek. Jelenleg ELISA-val meghatározhatók. Körülbelül 3-4 héttel a betegség megjelenése után megjelenik az IgG, amely ezt követően több hónapig megmaradhat. De az elemzés során nem mindig találhatók meg.

Az IgA a vérben 2-4 hét alatt képződik, míg 20% ​​-uk a szérumban, 80% -uk pedig a nyálkahártya szekréciójában található. Ezek az immunglobulinok általában 2-9 héten belül eltűnnek, ami a kórokozó megsemmisülését és a beteg gyógyulását jelzi. Ha az ELISA továbbra is kimutatja az IgA jelenlétét, akkor ez jelzi a folyamat krónikus formába való átmenetét..

Elemzési lehetőségek

A kapott adatoktól függően az ELISA válaszok űrlapon adhatók ki táblázat formájában, amely tartalmazza az összes AT és AG teljes listáját, és jelzi a pozitív vagy negatív reakciót. Bizonyos helyzetekben kvantitatív érték jelenik meg - élesen pozitív, pozitív, gyengén pozitív vagy negatív eredmény. A második lehetőség a vizsgált vérmintában lévő antitestek mennyiségét jelzi.

A fenti értékek mellett egy másik kvantitatív paramétert is megvizsgálnak az ELISA folyamatban - az AT aviditási indexet, százalékban számolva. Megmutatja, hogy a betegség mennyi ideig tart - vagyis minél magasabb a mutató, annál több idő alakul ki a patológiában.

Alternatív ELISA módszer

Az enzim immunvizsgálat meglehetősen jól ismert és elterjedt diagnózis. Lehet, hogy egyesek még soha nem hallottak róla, de ennek a tanulmánynak van egy másik változata, amelyet még kevésbé ismert emberek széles köre, amelyben nem vérmintát vesznek. Ezt a technikát az okkult vér székletének elemzésének nevezik, és sok esetben lehetővé teszi további kimerítő eljárások elkerülését, amelyeket kellemetlen érzések is kísérnek..

Az okkult vér (hemoglobinmolekulák) ELISA-vizsgálata lehetővé teszi az emésztőrendszer még jelentéktelen vérzésének kimutatását, amelynek jelei a páciens székletében, mint mondják, szabad szemmel nem találhatók meg. Az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat az emberi ürülékben rövid idő alatt megmutathatja a peptikus fekélyt, a polipózist, a divertikulózist, a daganatokat, amelyek korai szakaszában nem járnak bizonyos tünetekkel.

A mai napig több ezerféle enzim immunoassay vizsgálati rendszert hoztak létre, amelyek lehetőséget nyújtanak a patológiák hatalmas listájának AT és AG megtalálására. Ezért ezt az elemzést az orvostudomány szinte minden ágában alkalmazzák, bármilyen korosztály számára. Az abszolút ártalmatlanság pedig lehetővé teszi, hogy mind a terhesség alatt, mind a legyengült betegek diagnosztizálásához igénybe vegye.

ELISA elemzés: mi ez? miért van rá szükség? a módszer előnyei és hátrányai

ELISA elemzés - mi ez? Ennek a diagnosztikai módszernek a teljes nevét enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálatnak nevezik, és az emberi test által termelt különféle osztályú antitestek vagy immunglobulinok perifériás vérében történő meghatározásán alapul..

Az orvos gyakorlatában az ELISA elemzés nagyon fontos helyet foglal el, amikor bármilyen fertőző patológia diagnosztizálására van szükség. Ez az elemzés nemcsak egy fertőző betegség jelenlétét mutatja, hanem a kóros folyamat stádiumát is. Ezenkívül nem csak a kórokozóval kapcsolatban, az ELISA módszer is használható: allergiás állapotok diagnosztizálására szolgál. Ez a teszt lehetővé teszi az immunrendszer, a vérképző rendszer számos betegségének, autoimmun és egyéb rendellenességek azonosítását..

Miért van szükség IFA-ra??

Minden kutató hajlamos azt hinni, hogy az "antitest" elnevezés túl sajnálatos. Ennek ellenére tükrözi az immunglobulinok egyik fontos jellemzőjét: képesek megkötni és semlegesíteni a káros anyagokat, úgy lépnek hozzájuk, mint egy "kulcs" a "zárhoz". Az antitestek mennyisége a vérben nemcsak a test általános védekező képességét tükrözi a fertőzések ellen, hanem a keringő immunkomplexek képződésének képességét is, amelyek különféle autoimmun betegségek esetén fordulhatnak elő, például rheumatoid arthritis vagy spondylitis ankylopoetica esetén..

Az antigénnel (fertőző természetű káros tényezővel) rendelkező antitestek komplexei a test reakciójának eredménye a "kívülállók" bevezetésére. Ezért az immunrendszer megtanulja felismerni őket, a limfociták segítségével képezi az immunokompetens sejteket, és képesek nagyon specifikus antitestek előállítására. Tehát az Epstein vírus elleni antitestek másképp rendeződnek, mint a vírusos hepatitis C, E. coli és anti-HAV antitestek, vagy a hepatitis A vírus elleni antitestek - eltérően, mint a porcszövet autoantitestjei. Az immunoglobulinok magas specifitása és fertőző ágenssel való összeegyeztethetősége teszi rendkívül értékesé az ilyen laboratóriumi kutatásokat, mint egy enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat..

Az antitestek és antigének egyetlen komplexbe (antigén-antitest) való erős összekapcsolódása után a káros tényezők elveszítik képességüket a test szöveteinek károsítására, majd ezeket a komplexeket semlegesítik, vagy a neutrofilek fagocitózisban lizálják, és "megemésztve" elhagyják a testet.

Az ELISA vérvizsgálat megmutatja, hogy testünk milyen specifikus patogén faktorral néz szembe, milyen szakaszban zajlik a test és a fertőzés közötti kölcsönhatás folyamata. A vizsgálat után az orvos nagyfokú bizalommal készíthet előrejelzést, előírhat bizonyos típusú kezeléseket, és egyes esetekben akár meghatározhatja a beteg várható élettartamát is, különösen krónikus vírusfertőzések esetén, például vírusos hepatitis C esetén..

Bizonyos esetekben azonban a szervezetben egyáltalán nincsenek fertőző ágensek, és az antitestek "tévedésből" megtámadják saját szerveiket és szöveteiket, mivel az immunkompetens sejtek hamis információkat kaptak. Az ilyen betegségeket autoimmunnak nevezik, és egy enzim immunvizsgálat is segít felismerni ezt a krónikus patológiát és segít a diagnózisban.

További információ az immunglobulinokról

Összességében az emberi test 5 ismert antitestcsoportot termel, amelyeket Ig-nek neveznek (ami immunglobulinokat jelöl), amelyek az A, M, G, E és D osztályba tartoznak. Mindegyiküknek nagy jelentősége van az ELISA-elemzés eredményeinek értelmezésében. Természetesen vannak sokkal több komplexum, és még mindig nem mindegyik nyitott. De a különféle betegségek diagnosztizálásakor az első három antitesttípus a legértékesebb. Az ELISA vérvizsgálata a lehető legtöbb információt használja: az ellenanyagok megjelenésének pillanatában a vérben, koncentrációjuk változásától az idő függvényében, az eltűnés időtartamától, valamint a specifikus antitestek típusától.

Tehát az elsődleges, akut fertőző folyamat résztvevői az M osztályú immunglobulinok, amelyek mindig akut fázist jeleznek, még akkor is, ha a betegséget klinikailag törlik. Tipikus példa az akut vírusos hepatitis B vagy C anicteris formája. A hepatitis enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálata megmutatja, hogy egy személynek akut hepatitisa van, és az olyan tünetek, mint a hipochondriumban fellépő fájdalom, szájszárazság, fájó ízületek és egyéb nem specifikus tünetek könnyen megérthetővé válnak.

Néhány héttel később ezek az antitestek egyre eltűnőbb koncentrációban találhatók meg, és így a G osztályú immunglobulinok termelődnek. A vérben sok hónapig, sőt éveken keresztül meghatározzák őket, és felépülést jeleznek, majd akár életre is maradhatnak, erős immunitást képezve. Ez jelzi a patogén antigének elleni hatékony védelmet. Tehát, ebbe az osztályba tartozó antitestek teszik immunitussá az embert az ismételt lépfene és pestis eseteire. De vannak olyan esetek, amikor ezek az antitestek nem akadályozzák meg káros hatásukat antigének jelenlétében. Ebben az esetben a krónikus folyamat aktivitásának növekedéséről beszélhetünk..

Ami az IgE-t illeti, alkalmazható különféle parazita inváziók és allergiás állapotok diagnosztizálásában, az IgD pedig kiegészítő funkciót lát el: az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat lehetővé teszi a bronchiális asztma és az autoimmun állapotok komplex diagnosztizálásában. Természetesen az ELISA-elemzés megfejtése sokkal bonyolultabb, és szakemberek - az immunológusok sokkal többet tudnak mondani. Melyek arra utaló jelek, hogy a beteg önállóan kapcsolatba léphet a laboratóriummal a kutatás elvégzése érdekében?

Az elemzés indikációi

Először is meg kell értenie, hogy nincs ilyen elemzés - „csak vér az ELISA számára”. Van egy elemzés a hepatitisről, előfordul - az ureaplasma vagy a szifilisz szempontjából. Így az ELISA-hoz való véradás csak a kívánt fertőzés keresésének "elrendelésével" célozható meg. Csak annyira érthetetlen, miért adjunk vért vénából, nem tudva, mire kell figyelni. Ezért az enzim immunoassay hatékony eszköz, amely fontos a diagnosztikai keresésben. Csak orvos írhatja fel ezt az elemzést, mivel céltudatosan olyan fertőzést keres, amelyet ezek a tünetek jellemeznek. Egy hétköznapi ember természetesen 150 vérvizsgálatot rendelhet ELISA módszerrel "minden fertőzésre", de ez ésszerűtlen és költséges megközelítést jelentene a diagnózisban, mindenre vizsgálatot végezve.

Ezeknek a teszteknek a legkeresettebb kinevezése a következő betegségekre és állapotokra:

Különböző mikrobiális és vírusos fertőzések, fertőző betegségek tünetei - kiütés, láz, sárgaság, duzzadt nyirokcsomók, hasmenés szindróma, nemi úton terjedő betegségek gyanúja.

Az ELISA technika segít az ureaplasma és a mycoplasma, a szifilisz és a chlamydia, a tuberkulózis és a citomegalovírus fertőzés, a herpesz, a vírusos hepatitis és az Epstein-Barr vírus meghatározásában. Jelenleg mintegy 500 különböző fertőzés igazolható az enzim immunoassay segítségével.,

Ha helmintikus invázióra gyanakszik, és olyan tünetek vannak jelen, mint allergia, eozinofília a vérben, viszketés, dyspepsia és fogyás,

További információ az ilyen típusú kutatásról a "Vérvizsgálat férgek és paraziták számára: kutatási módszerek, ELISA, kinek és hogyan lehet adományozni" című cikkben..

Angioödémát, csalánkiütést, légszomjat és asztmás rohamokat okozó allergének kimutatásakor.

Ebben az esetben specifikus Ig E-t detektálnak, és vannak olyan teljes allergiás panelek, amelyek segítenek pontosan meghatározni az allergént - tintahal vagy garnélarák, daphniát tartalmazó halak száraz étele, házi por. A szénanátha esetén ez a módszer lehetővé teszi, hogy pontosan megtalálja azt a gabonafélét, cserjét vagy fát, amely tavaszi tüsszentést és könnyezést okoz.,

  • Ezt a módszert autoimmun betegségek gyanúja esetén mutatják be, amelyeket reumatológusok kezelnek,
  • Ha a tumor növekedése és aktivitása gyanítható,
  • Az immunhiányos állapotok és a HIV - fertőzés komplex diagnosztikájában,
  • Vérbetegségek és transzplantáció esetén az immunitás átfogó értékelése, például máj- vagy vesetranszplantáció előtt.

Most már tudjuk, miért kell vért adnia az ELISA-hoz. Tudja meg, hogyan zajlik ez a tanulmány.

Hogyan történik az elemzés?

A klasszikus anyag a beteg vénás vére. De ha szükséges, sokféle folyadékot és szövetet vizsgálhat meg: nyálka, nyál, nyaki váladék, cerebrospinalis folyadék, üvegtest, a köldökzsinór tartalma és a magzatvíz. Fontos megjegyezni, hogy a különféle gyógyszerek szedése, a túlzott fizikai aktivitás, az alkoholfogyasztás nagymértékben torzíthatja a teszt eredményeit..

Számos módszer lehetővé teszi ezt az elemzést. A klinikai laboratóriumokban alkalmazott leggyakoribb módszer a fotometriai módszer. Ebben az esetben festékkel címkézett anyagokat használnak, amelyek reakciója és az antigén-antitest komplex megjelölése után színük megváltozik. Ennek eredményeként az oldat optikai sűrűsége is változik, és ez a változás egyenesen arányos a kimutatott antitestek koncentrációjával. Laboratóriumi spektrofotométereket sikeresen alkalmaznak ezen eltérések mérésére.

Az ELISA esetében fluorometrikus módszert is alkalmaznak, amely a fluoreszcencián alapul. Itt is kiszámítják a vizsgált mintákra telepedett fluoreszcens anyagok intenzitását..

Végül az immunológiai elemzés elektrokémiai módszerekkel határozza meg az enzimek aktivitását, amelyek az antigének és antitestek speciális jelzői. Maga az enzim immunvizsgálat leggyakrabban olyan enzimek használatát foglalja magában, mint például az alkalikus foszfatáz, a torma-peroxidáz és a galaktozidáz. Ezek az enzimek képesek antitestekhez vagy antigénekhez kötődni és aktivitásuk miatt megjelölni őket.

A módszer hátrányai és előnyei

A nyilvánvaló "pluszok" magukban foglalják az elemzés demokratikus költségeit, annak szűrési lehetőségét a lakosság nagy csoportjaiban, például a terhes nők HIV-vizsgálata során. Az enzim immunvizsgálat módszere meglehetősen specifikus, és számos betegség kezelésének minőségének ellenőrzésére használható. Fontos, hogy az elemzés gyorsan elkészüljön, egyszerű és biztonságos legyen a beteg számára..

Sok buktató van. Tehát, ha az immunglobulinokat nem detektálják, akkor ez nem jelenti a betegség 100% -os hiányát. Valójában az immunhiány hátterében a test egyszerűen nem "rendelkezik erővel" az antitestek szintetizálásához. Ha a betegnek súlyos májelégtelensége van, akkor a máj egyszerűen nem képes szintetizálni a fehérjét, amely az antitestek építőköve. Ebben az esetben az eredményt szeronegatívnak nevezik, és a fertőzés megerősítésére közvetlen és legfejlettebb kutatási módszer - PCR vagy polimeráz láncreakció - szükséges. Az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálattal ellentétben ez a módszer nem tárja fel a szervezet reakcióját a fertőző folyamatra (amely lehet hibás, vagy hiányozhat teljesen), PCR-rel az örökletes anyagot közvetlenül meghatározzák, vagy maga a kórokozó található.

Az enzim immunoassay módszer hibát adhat számos krónikus betegség hátterében, az immunszuppresszív terápia hátterében. A helmintológiában és a parazitológiában van egy törvény: a parazita vagy petesejtjeinek kimutatása abszolút megbízható módszer a diagnózis felállítására. Az ELISA kereszt- és hamis pozitív módszereket kínál, reagálva a beteg életének számos normális eseményére.

Összegzésképpen el kell mondani, hogy az enzimhez kapcsolt immunszorbens teszt számos betegség laboratóriumi diagnózisának hatékony, de kiegészítő módszere. De mindenesetre a diagnózisnak számos tényezőn kell alapulnia: a beteg panaszain és anamnézisén, vizsgálati adatokon, valamint egyéb kiegészítő és instrumentális diagnosztikai módszereken..

Mi az ELISA vérvizsgálat és miért fontos a diagnózis szempontjából?

Mi az ELISA vérvizsgálat

Ez egy laboratóriumi vizsgálat, amely lehetővé teszi bizonyos antigének (fehérje jellegű vér védőfaktorai) jelenlétének meghatározását bizonyos antigének (kórokozók) ellen. Az antitestek közül kiemelkedő jelentőségű az immunglobulinok, amelyek létezhetnek immunokomplexek formájában.

Az immunglobulinok az emberi immunitás komplex neurohumorális reakcióinak eredményeként keletkeznek, amelyek idegen antigének bevezetésére adott válaszként keletkeznek. A patogén ágensek mindegyik típusához saját specifikus antitestek termelődnek. Antigén vagy kóros mikroorganizmus "megkötésével" működnek, összetett "antigén-antitest" vegyületet képezve, ezt követő semlegesítéssel, enzimatikus lízissel, fagocitózisos reakciókkal és a testből történő kiválasztással..

Felhívjuk figyelmét: bizonyos komplexek jelenlétével, az ELISA módszerrel határozzák meg a kórokozó típusát vagy a beteg számára elérhető káros anyagot.

Az emberi immunitás működésének alapelveit a videó áttekintésével tekintheti meg:

Szendvics típusú immunvizsgálat

Ábra: 2. A "szendvics" típusú immunvizsgálat sematikus ábrázolása. ATp - támogató antitest, ATd - detektor antitest, AG - antigén, M - jelző kovalensen kötődik a detektor antitesthez, P - szubsztrát, amelyre a hordozó antitest sorbálódik.

Az immunvizsgálat ezen változatában (2. ábra) a vizsgált antigén térbeli távolságú epitópjaira specifikus antitestpárot használunk.

I. Az antitestek szorbciója támogatja

Az immunvizsgálat céljából egy 96 üreges lemez üregében a szubsztrát antitesteket lyukanként 1-2 μg szorbáljuk 100 μl foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS). Az inkubálást 30 percig szobahőmérsékleten végezzük, és vízszintes lemezrázón rázzuk. A megkötetlen antigénmolekulák kétszeres mosását 0,1% Tween-20-t (PBST) tartalmazó foszfát-fiziológiás sóoldattal végezzük..

II. Letiltás

A nem specifikus kötődési helyek blokkolásához a lemez üregeit PBST-vel töltjük és 10-15 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk..

III. Antigén inkubáció

Az adszorbeált antitestekkel ellátott lemez üregei 50 μl vizsgálati oldatot vagy az antigén standard hígításait adják hozzá. Az antigénhígításokat PBST-vel kell elkészíteni, mivel a Tween-20 csökkenti a fehérjemolekulák nem specifikus kötődését egymáshoz és a lemez felületéhez. Mind a tesztoldatot, mind a standard antigénhígításokat párban (vagy 3 ismétlésben) alkalmazzuk, minden fehérjehígításhoz két (három) üreget használva. Az inkubálást szobahőmérsékleten 30 percig folytatjuk állandó keverés mellett. A mosást PBST-oldattal háromszor végezzük.

IV. Inkubálás enzimhez kapcsolt antitestekkel

A lemez üregeihez adjunk hozzá 100 μl specifikus antitestek enzimjelzéssel konjugált oldatát. A konjugált antitestek optimális koncentrációját általában a gyártó jelzi (általában 2-4 μg / ml koncentrációt alkalmaznak). Enzimmel jelölt antitestekkel inkubálunk 30 percig szobahőmérsékleten, és vízszintes lemezrázón rázzuk. A mosást 5-6 alkalommal végezzük PBST-vel.

V. enzimatikus reakció végrehajtása, színes termék megjelenésével együtt

Adjunk hozzá 100 μl szubsztrátoldatot a mélyedésekhez, és inkubáljuk 10 percig szobahőmérsékleten és állandó keverés közben.

Vi. Az enzimatikus reakció leállítása

Az optikai sűrűség mérése előtt a színreakciót 0,5 M H2SO4-tal leállítjuk. Inkubálás után 50 μl 0,5 M kénsavoldatot adunk az üregekhez az OPD munkaoldattal. Ezt követően azonnal megkezdheti az optikai sűrűség mérését.

Vii. Az optikai sűrűség mérése

A színezett termék oldatának optikai sűrűségét lemezspektrofotométerrel mértük λ = 490 nm-en.

nyomtatott verzió

Mik az immunglobulinok

Az immunglobulinok 5 fő osztályát fedezték fel és vizsgálták - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. a többiek szerepe még nem tisztázott teljesen, és a tudományos kutatás szakaszában van.

Kérjük, vegye figyelembe: a gyakorlati orvostudományban a legfontosabbak az A, M és G. osztályú immunglobulinok. A definíció informatív értéke megjelenésük, maximális és eltűnésük különböző időintervallumain alapul..

Vizsgáljuk meg ezt a kérdést részletesebben..

Az immunglobulin A (IgA) fő feladata a légzőrendszer, a gyomor-bél traktus és a vizeletrendszer nyálkahártyájának védő funkciója. A betegség akut megjelenésével lehetetlen azonosítani őket. Ezek a védő komplexek csak a betegség kezdetétől számított 2 héten belül, néha később jelentkeznek. Az immunglobulin A zöme a nyálkahártya szövetekben koncentrálódik. Körülbelül 80%. Az antitestek többi része kering a vérben. A fő funkció a mikroorganizmusok semlegesítése és megsemmisítése. A betegség akut megnyilvánulásainak csillapodása után ezeknek az immunglobulinoknak a mennyisége kezd csökkenni és teljesen eltűnik a betegség kezdete után akár 8 hétig is. Ha az IgA-t később észlelik, akkor ez a folyamat kronizálását jelzi.

A kialakuló patológia akut fázisának fő és első markere az M osztályú immunglobulinok (IgM). A rosszullét megjelenésének 5. napjáig találják meg őket. A vérben való jelenlétük körülbelül 6 hétig meghatározható. Aztán gyorsan fakulni kezdenek.

A maradék immunválaszt a G osztályú immunglobulinok (IgG) jelenléte jellemzi a vérben. Ezeknek a tényezőknek a vérben való megjelenését körülbelül egy hónappal a betegség megjelenése után észlelik. A jövőben sok hónapra, évre, sőt egész életre meghatározhatók, védő funkciót töltenek be a betegség visszatérése (visszaesése) ellen, és egyes esetekben lehetetlenné teszik a patológia másodlagos fejlődését. Ha az immunglobulin G mennyisége ismét emelkedni kezd, akkor újrafertőzés gyanítható. Hasonló következtetés vonható le két-három teszt elvégzésével, 2 hét intervallummal..

Az immunglobulin E-t (IgE) a parazitológia gyakorlatában alkalmazzák.

Az immunglobulin D (IgD) a B-limfocitákon található, és egészséges embereknél alacsony koncentrációban található meg. 10 éves élet után eléri maximális értékét. Az immunoglobulin D mennyisége terhesség alatt nő, szisztémás kötőszöveti betegségekben, bronchiális asztmában, immunhiányos állapot által okozott betegségekben.

Ellenjavallatok

Az enzim immunvizsgálat szempontjából nem azonosítottak kardinális ellenjavallatokat. Néha a terhesség alatt, amikor a páciens folyamatos hormonváltozással rendelkezik a vérben, szükség lehet többször elvégezni az elemzést a megbízhatóbb eredmény érdekében. A diagnosztikai módszer alkalmazása nem ajánlott:

  • sebészeti beavatkozások;
  • hemolízis (vörösvértestek pusztulása);
  • vérátömlesztés;
  • biológiai anyag szúrása vagy biopsziája.

Az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat kijelölésének indikációi

Antitestek meghatározása a kórokozó mikrobák testben való jelenlétére, amelyek:

  • szifilisz;
  • trichomoniasis;
  • ureaplasmosis és mycoplasmosis.

Növekszik az immunglobulinok mennyisége és a helmintikus inváziók.

Diagnosztikát végeznek a következők felderítésére:

  • herpesz betegségek;
  • vírusos hepatitis csoportjai;
  • Epstein-Barr vírus;
  • citomegalovírus.

Az ELISA segítségével meghatározhatja antitestek jelenlétét 600 típusú allergén ellen, észlelheti az immunhiány állapotát, átfogó vizsgálatot végezhet a transzplantációs műtét előtt, átfogó elemzést végezhet a kezelés hatékonyságáról.

Az ELISA egy további módszer a rákos sejtek kimutatására.

Kiképzés

Az ilyen típusú vérvizsgálat elve azon alapul, hogy specifikus antitestek képződnek az emberi testben, amikor az antigének belépnek, vagyis olyan idegen szerek, amelyek egy adott betegség kialakulását okozzák. Kölcsönhatásuk eredményeként az "antigén - antitest" komplexek képződnek, amelyeket az enzim immunvizsgálat végrehajtásának kutatása alá vetnek..

E tekintetben annak érdekében, hogy ne befolyásolják ezeket a komplexeket, és ennek megfelelően a kapott eredmények megbízhatóságát, a vér és más biológiai anyagok ELISA-elemzése némi előkészítést igényel..

A vért éhgyomorra adják, szintén 14 nappal a várható vizsgálat előtt, a specifikus kezelést felfüggesztik, és leállítják az antibakteriális, vírusellenes gyógyszerek alkalmazását.

Az ELISA vérét vénából adják. Közvetlenül a vérvétel előtt korlátozni kell a fizikai aktivitást, valamint kerülni kell a dohányzást és az alkoholos italok fogyasztását.

Hogyan végezzük a vér ELISA-t?


Az enzim immunvizsgálathoz a legtöbb esetben a betegek vérét használják, néha az üvegtest szövetét, a gerinccsatorna folyadékát, a magzatvizet veszik fel..

A vért egy injekciós tűn keresztül fecskendőbe kell venni a kubitalis vénából. A vizsgálatot éhgyomorra végezzük. Nem szabad elfelejteni, hogy bizonyos gyógyszerek szedése befolyásolhatja a teszt eredményét. Véradás előtt tartózkodnia kell a dohányzástól és az alkoholfogyasztástól. A kábítószer-fogyasztás torzíthatja az eredményeket.

Az immunglobulinok IgM, IgG, IgA negatív értéke esetén beszélhetünk a betegség hiányáról vagy annak kezdeti fázisáról, és jelentős idő elteltével teljes felépüléssel lehetséges a mínuszok eredménye..

Ha az IgA és az IgM nem kerül kimutatásra, és az IgG pozitívan nyilvánul meg, akkor valószínűleg egy fertőző betegség vagy az oltás után kialakult immunitásról beszélünk.


Magas IgM-titer és negatív IgG-értékek, IgA esetén megállapítható, hogy akut fertőző betegség van.

Az immunglobulinok eredményeinek egyidejű pozitív értéke - IgA, IgM, IgG jellemző a fennálló krónikus betegség kiújulásának akut fázisára.

Krónikus fertőzés esetén a folyamat csökkenése (remisszió) esetén az ELISA az immunglobulin M (IgM) negatív értékeit mutatja, míg a G (IgG) és az A (IgA) immunglobulinok eredménye pozitív lesz..

Reagens készletek

Az enzim immunvizsgálat készleteit különböző gyártók gyártják, különféle konfigurációkban. Oroszországban elismert. Ez a gyártó reagenskészleteket állít elő a szélességi körünkben gyakori fertőzések ELISA-módszerrel történő vizsgálatához, amelyek így elemezhetők. Maguk a reagensek mellett a készletek további anyagokat tartalmaznak, amelyek biztosítják a biztonságot, a kényelmet és az elemzés gyorsaságát. Ezenkívül a kémiai anyagokat különböző színekkel színezik, ami csökkenti annak valószínűségét, hogy a laboratóriumi asszisztens reagenst választ..

A kémiai és biológiai készletek relatív elérhetőségükben különböznek, ami közvetlenül befolyásolja az enzim immunvizsgálat eloszlását és elérhetőségét a populáció számára.

Az enzim immunoassay módszer előnyei

Az ELISA módszer fő előnyei:

  • alacsony elemzési költség;
  • diagnosztikai specifitás, pontosság;
  • dinamikus kontroll (ismételt elemzés a kezelés hatékonyságának és a betegség stádiumainak meghatározásához);
  • tömeges vizsgálatok lefolytatásának lehetősége a fertőzés gócaiban;
  • az eredmény elérésének sebessége;
  • viszonylag egyszerű elemzés;
  • az információs technológia alkalmazásának lehetősége a feldolgozás során;
  • biztonság és fájdalommentesség a beteg számára.

Amikor kinevezi

Az ELISA módszert az egyik legpontosabb diagnosztikai módszernek tekintik, megbízhatósága meghaladja a 90% -ot. Az elemzést különböző súlyos betegségek és veszélyes állapotok azonosítására használják..

Milyen kórképek azonosíthatók:

  • vírusos hepatitisz;
  • HIV;
  • citomegalovírus fertőzés;
  • herpeszes patológia;
  • mononukleózis;
  • toxoplazmózis;
  • rubeola, kanyaró;
  • a parazitózis egyes típusai;
  • a Helicobacter pylori által okozott patológiák;
  • onkológiai betegségek;
  • allergiás reakciók;
  • hormonális rendellenességek;
  • problémák a reproduktív rendszer munkájában;
  • autoimmun patológiák;
  • fejlődési rendellenességek, magzati deformitások.

Az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat terhesség alatt lehetővé teszi, hogy felmérje a vese, a szív, az erek bizonyos patológiáinak kialakulásának kockázatát.

A diagnózist az antitestek szintjének figyelemmel kísérésére végzik, amelyek súlyos neurológiai rendellenességeket okozhatnak a gyermeknél.

Immunvizsgálat vérvizsgálat parazitológiában


Az ELISA alkalmazásának lehetőségét a parazita betegségek diagnosztizálásában a specifikus immunglobulin E (IgE) határozza meg, amely általában növekszik ebben a betegségcsoportban. Ezenkívül az immunglobulin E az allergiás folyamatokkal társuló atópiás reakciók markere. A vérben kis mennyiségben található meg. Fő lokalizációja a nyálkahártya, a bazofil és a marcophag. Ennek a fehérjekomplexumnak a fő feladata a test nyálkahártyájának védelme. De ugyanakkor részt vesz a paraziták elleni immunválaszban. Az eozinofilek és a makrofágok „kezelik” az IgE aktiválását. Ez fontos tény az elemzési adatok összehasonlításakor a betegség diagnózisának megállapításakor..

Az ELISA-t a következők kimutatására használják:

  • kerek helminták (ascaris, pinworms);
  • az opisthorchiasis akut és krónikus formái;
  • trichinózis;
  • a lamblia jelenléte (kiegészítő elemzésként);
  • a leishmaniasis formái;
  • amoebiasis;
  • toxoplazmatartalom;

Fontos: Az immunoglobulinok a szervezetben bizonyos antigének ellenanyagaként termelődnek. Ezért az elemzés legnagyobb specifitása mellett sem zárják ki a pontosság hibáit. Parazita betegségek esetén a valószínűség százaléka körülbelül 90%.

Összegzésként meg kell jegyezni, hogy a modern immunológia folyamatosan fejlődik, új módszereket keres a betegségek diagnosztizálására és kezelésére..

Sztepanenko Vlagyimir, sebész

Ma összesen 67

(54 szavazat, átlag: 4,17 az 5-ből)

Hasonló bejegyzések
Lipid vérvizsgálat
Kreatinin vérvizsgálata: normák, dekódolás, az adományozás módja

Egy kicsit a fehérjék emberi szervezetben betöltött védő szerepéről

A fertőzés után az emberi antitestek megváltoztatják koncentrációjukat a vérben, a betegség stádiumától függően. Az antitestek mennyiségének és minőségének tanulmányozása segít meghatározni, hogy ez a fázis akut vagy krónikus-e, és mennyire hatékonyan birkózik meg a szervezet az idegen flórával.

Az ELISA elemzés hatékony a hormonális rendellenességek, a rák és az immunrendellenességek meghatározásában. Korai stádiumban képes felismerni olyan súlyos betegségeket, mint a hepatitis B és a szifilisz, a HIV-fertőzés, valamint számos olyan vírust, amelyek semmilyen módon nem jelentkeznek, például a citomegalovírust.

Érvek és ellenérvek

Az enzimhez kapcsolt immunszorbens diagnózis számos előnnyel jár más vizsgálati módszerekkel szemben:

  1. Nagy érzékenység (akár 90%)
  2. A diagnosztikai készletek elfogadható ára.
  3. Stabilitás, miközben a teszt összes összetevőjét megmenti (több mint egy év);
  4. A fertőzés kimutatásának lehetősége az első szakaszban.
  5. A kutatás kényelme és hatékonysága.
  6. A tömeges felmérések alkalmassága.
  7. Egyesítés.
  8. A diagnosztizált anyag minimális mennyiségének felhasználási lehetősége.
  9. A fertőző jellegű patológia dinamikájának követésének egyszerűsége.
  10. Elérhetőség (ma az enzim immunvizsgálatot minden kórházban és klinikán elvégzik)
  11. A reakció szakaszainak automatizálása.

A tanulmány hiányosságai a következők:

  • Nem magát a kórokozót, hanem a szervezet immunválaszát észleli a kórokozó behatolására..
  • Hamis pozitív (hamis negatív) eredmény megszerzésének lehetősége bizonyos gyógyszerek szedése, technikai hiányosságok, káros anyagcsere, több krónikus betegség jelenléte miatt.

A technika lehetőségei

Az ELISA vérvizsgálatának alkalmazási területe meglehetősen széles - jelenleg nem lehet elképzelni, mennyire bonyolult lenne sok betegség okának felkutatása. Az ilyen kutatásokat ma szinte az összes orvosi területen alkalmazzák, még az onkológiában is. Noha a tájékozatlanok számára nehéz megérteni, egyes esetekben, miután végrehajtották, sikerült megmenteni a betegek életét, mivel a daganatot már a korai szakaszban felfedezték..

Fontos! ELISA - vérvizsgálat, amely néhány rosszindulatú folyamatra jellemző markert mutat, amely lehetővé teszi a betegség észlelését abban az időszakban, amikor más módszer ellenőrzése alatt áll.

A modern diagnosztikai központokban a laboratóriumi vizsgálatokat nemcsak daganatmarkerek képviselik - ezek a panelek lenyűgöző arzenáljával vannak ellátva ennek a diagnózisnak a végrehajtásához. Segítségükkel számos kóros állapot meghatározható, például hormonális rendellenességek és különböző eredetű fertőző folyamatok..

Ezenkívül az ELISA vérvizsgálat elvégzése és dekódolása lehetővé teszi a gyógyszerek hatásának nyomon követését egy beteg ember, sőt egy állat testére is. Ez utóbbit széles körben alkalmazzák az állatorvosi klinikákon, elősegítve háziállataink vagy kenyérkeresőink egészségének fenntartását, stabil étrendben pótolhatatlan hús-, tejtermék- és tojástartalmat biztosítva..

Tehát csak néhány milliliter vénás vér felvétele és annak ELISA módszerrel történő diagnosztizálása eredményeként az orvos, miután leírta a kutatási anyagokat, képes lesz meghatározni:

  • hormonális állapot, ideértve az ivarmirigyek és a pajzsmirigy, valamint a mellékvesék biológiailag aktív anyagait;
  • bakteriális és vírusos fertőzések (hepatitis B és C, szifilisz, herpesz, chlamydia, tuberkulózis, myco- és ureaplasmosis, HIV, TORCH) és más ilyen jellegű betegségek jelenléte;
  • a kóros folyamat kórokozóinak létfontosságú aktivitásának jelei, amelyek gyógyulással végződtek és átjutottak az antitestképződés szakaszába (immunválasz).

Az ilyen komplexeket sokkal könnyebb felismerni és eltávolítani az immunsejtek által. Az antitestek formájában fennmaradó többszörös hatásokat a vér egész életen át tartalmazza, ami gyakorlatilag nullára csökkenti az újrafertőződés kockázatát.

Paraziták és más mikroorganizmusok enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálata - a test egészségének károsítói nemcsak a kórokozók jelenlétének megállapítását teszik lehetővé, hanem a beteg vérplazmájában való számukról is. Így egy ilyen vizsgálat lehetővé teszi a szérum anyagában található patogén mikroorganizmusok kvalitatív és kvantitatív elemzését..

A kórokozó koncentrációjának szintje jelentősen befolyásolja a fertőzés kialakulását és a gyógyulás sebességét, ezért a minőségi értékelést nem kevésbé fontosnak tekintik, mint egy mennyiségi értékelést. Korántsem kapta meg az utolsó szerepet mind a gyermekek, mind a felnőttek kezelésében. De hogyan lehetséges, hogy az ELISA képes felismerni az emberek és állatok testében parazitáló mikroorganizmusok ilyen széles körét, kárt okozva és csökkentve az életminőséget??

A kutatási módszertan a kijelölt feladatok elvégzésének több lehetőségén (közvetlen és közvetett - versenyképes és nem versenyképes) alapul, amelyek mindegyike meghatározott célokat szolgál. Ez a megközelítés lehetővé teszi a célzott keresést, és a lehető legrövidebb idő alatt azonosítja az adott patológia okát.

Amikor a vérplazmával a kútba kerül, az antigének vagy antitestek azonosítják az objektumot az orientációjukkal összefüggésben, és komplexet alkotnak (AG - AT). Ezt a képződést egy enzimvegyület (konjugátum) rögzíti, amely később a kút megváltozott színeként nyilvánul meg. Az ELISA-t speciális tesztrendszereken állítják elő, amelyeket speciális laboratóriumokban gyártanak és teljes reagenskészlettel látnak el.

Ez az elemzés elvégezhető alátéteken - alátéteken és spektrofotométer-leolvasásokon, de ezek kézi munkát igényelnek. Természetesen egy laboratóriumi asszisztensnek többször kényelmesebb és gyorsabb az összes manipulációt teljesen automatizált eszközökön végrehajtani. Használatuk során a laboratóriumi személyzet megszabadul a nagy mennyiségű monoton tevékenységtől - mosás, csepegtetés és a többi rutin, de nem minden orvosi intézmény engedheti meg magának ilyen drága berendezéseket

Ezért sok kórház és diagnosztikai intézmény folytatja az ELISA-t régimódi módon - félautomatikus eszközökön..

A kutatási anyagok értelmezése kizárólag a laboratóriumi diagnosztikus kompetenciájába tartozik - az eredményeket csak neki lehet elmondani a betegség lefolyásának sajátosságairól és finomságairól. Ebben az esetben az orvosnak figyelembe kell vennie a hamis negatív vagy hamis pozitív válaszok megszerzésének lehetőségét..

Az ELISA elemzés eredményei azon enzimek kémiai reakcióinak megszerzésén alapulnak, amelyek speciális azonosító jelként szolgálnak az antitestek felismerésére. Ezért az antitestek kölcsönhatásba lépnek egyes antigénekkel az immunkémiai reakciók során. Mindez azt állítja, hogy a hamis eredmények minimálisak az ELISA-hoz való véradás során..

A tanulmány lehetővé teszi az immunsejtek számának, tulajdonságainak, valamint a szükséges antitestek jelenlétének meghatározását

Pozitív eredményt veszünk figyelembe, ha az oldatban szín található. Az antigének kölcsönhatásba lépnek az antitesttel. Ha semmi ilyesmi nem történik, az eredmény negatív..

Az enzim immunvizsgálatnak számos módszere és módszere létezik: közvetlen és közvetett módszer, kompetitív és blokkoló módszer.

A vér (bármely más biológiai anyag) ELISA vizsgálatának középpontjában egy olyan algoritmus áll, amely két reakció - immun és enzimatikus - megvalósításából áll..

Az első során a kóros szerek a kutatáshoz vett biológiai anyag sejtjeinek védőelemeihez kötődnek. Antigén-antitest immun komplex képződik. Ez így néz ki. Az antigének abszolút minden sejt felszínén vannak jelen.

RÉSZLETEK: Vér a chlamydia transzkriptumon

Amikor az idegen sejtek bejutnak a testbe, azokat immunsejtek fogják el (amelyek felszínén antitestek találhatók), amelyek összehasonlítják az újonnan érkezett sejtek felszínéről származó antigének adatait a saját "memóriájukban" tárolt információkkal. Ha ezek az adatok nem egyeznek, akkor bekapcsolják a test védelmi funkcióit, amely egy immun komplex kialakulásában áll.

Ezt követően enzimatikus reakciót hajtunk végre, amely megjeleníti az előző reakció eredményeit. Elve az anyag egyikből a másikba történő átalakításán alapul. Az immunreakció során képződő ELISA-anyagok minden egyes típusához tartozik egy bizonyos enzim, amelynek kezelésével idegen szer koncentrációját határozzák meg (az oldat színének intenzitása szerint)..

ELISA - enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat: transzkriptum

Feladta: Parazitolog a diagnosztikában 2019. február 16

A diagnosztikai módszer (ELISA) informatív és nem túl drága, ezért számos laboratórium kínálja ügyfeleinek ezt a módszert (enzimhez kapcsolt immunszorbens teszt). A vizsgálatot éhgyomorra végzik, az elemzéshez szükséges vért a beteg kubitalis vénájából veszik. Az ELISA előtt tanácsos nem dohányozni és alkoholt fogyasztani.

Mi az ELISA vérvizsgálat

A vérelemzési módszerek közül, amelyek lehetővé teszik a test fertőző betegségek elleni ellenállásának értékelését és a betegség fázisának kimutatását, az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat (ELISA) fontos helyet foglal el. Ez a tanulmány lehetővé teszi a vér védő funkciójának átfogó értékelését és az immunhiány állapotának azonosítását fertőző patológiákban, valamint vérbetegségeket, autoimmun folyamatokat, hormonális problémákat.

Ez egy laboratóriumi vizsgálat, amely lehetővé teszi bizonyos antigének (fehérje jellegű vér védőfaktorai) jelenlétének meghatározását bizonyos antigének (kórokozók) ellen. Az antitestek közül kiemelkedő jelentőségű az immunglobulinok, amelyek létezhetnek immunokomplexek formájában.

Az immunglobulinok az emberi immunitás komplex neurohumorális reakcióinak eredményeként keletkeznek, amelyek idegen antigének bevezetésére adott válaszként keletkeznek. A patogén ágensek mindegyik típusához saját specifikus antitestek termelődnek. Antigén vagy patológiás mikroorganizmus "megkötésével" működnek, és egy komplex "antigén-antitest" vegyületet képeznek, ezt követő semlegesítéssel, enzimatikus lízissel, fagocitózisos reakciókkal és a testből való kivonással. Az ELISA-módszer bizonyos komplexek jelenlétével határozza meg a jelenlévő kórokozó vagy káros anyag típusát..

Érdemes emlékezni arra, hogy az elvégzett kúra után az antitestek nagyon sokáig maradhatnak a testünkben, még akkor is, ha a fertőzés elhagyta testünket, azaz megmarad az úgynevezett "szerológiai heg". Például az éjszakai égbolton több ezer csillag található. E csillagok közül sokan már régen meghaltak, de fényük mostanáig, évszázadok óta világít. Valójában csak egy csillagutat látunk. A fény megvan, de a csillag már régen eltűnt.

De ha nincs fény, ez nem azt jelenti, hogy a csillag nem volt ott. Ugyanez van az antitestekkel is. Jelenlétük nem garantálja a kívánt fertőző ágens jelenlétét a szervezetben. Az antitestek hiánya nem jelenti azt, hogy nincs fertőzés. Ha az ELISA-val végzett elemzés eredménye pozitív, akkor ez azt jelenti, hogy specifikusabb és drágább módszerekkel - PCR-rel, bakteriológiai tenyészetekkel - kell fertőzést keresni. Hamis pozitív eredmény lehetséges, ha több mikrobának van hasonló antigénszerkezete, akkor „hasonló” antitestek keletkeznek a különböző mikrobák számára.

Mik az immunglobulinok

Az immunglobulinok 5 fő osztályát fedezték fel és vizsgálták - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. a többiek szerepe még nem tisztázott teljesen, és a tudományos kutatás szakaszában van.

Az immunglobulin A (IgA) fő feladata a légzőrendszer, a gyomor-bél traktus és a vizeletrendszer nyálkahártyájának védő funkciója. A betegség akut megjelenésével lehetetlen azonosítani őket. Ezek a védő komplexek csak a betegség kezdetétől számított 2 héten belül, néha később jelentkeznek. Az immunglobulin A zöme a nyálkahártya szövetekben koncentrálódik. Körülbelül 80%. Az antitestek többi része kering a vérben.

A kialakuló patológia akut fázisának fő és első markere az M osztályú immunglobulinok (IgM). A rosszullét megjelenésének 5. napjáig találják meg őket. A vérben való jelenlétük körülbelül 6 hétig meghatározható. Aztán gyorsan fakulni kezdenek.

A maradék immunválaszt a G osztályú immunglobulinok (IgG) jelenléte jellemzi a vérben. Ezeknek a tényezőknek a vérben való megjelenését körülbelül egy hónappal a betegség megjelenése után észlelik. A jövőben sok hónapra, évre, sőt egész életre meghatározhatók, védő funkciót töltenek be a betegség visszatérése (visszaesése) ellen, és egyes esetekben lehetetlenné teszik a patológia másodlagos fejlődését..

Ha az immunglobulin G mennyisége ismét emelkedni kezd, akkor újrafertőzés gyanítható. Hasonló következtetés vonható le két-három teszt elvégzésével, 2 hét intervallummal..

Az immunglobulin E-t (IgE) a parazitológia gyakorlatában használják.Az immunglobulin D (IgD) a B-limfocitákon található, és egészséges embereknél alacsony koncentrációban található meg. 10 éves élet után eléri maximális értékét. Az immunoglobulin D mennyisége terhesség alatt nő, szisztémás kötőszöveti betegségekben, bronchiális asztmában, immunhiányos állapot által okozott betegségekben.

Hogyan végezzük a vér ELISA-t?

Az enzim immunvizsgálathoz a legtöbb esetben a betegek vérét használják, néha az üvegtest szövetét, a gerinccsatorna folyadékát, a magzatvizet veszik fel..

Az immunglobulinok IgM, IgG, IgA negatív értéke esetén beszélhetünk a betegség hiányáról vagy annak kezdeti fázisáról, és jelentős idő elteltével teljes felépüléssel lehetséges a mínuszok eredménye..

Ha az IgA és az IgM nem kerül kimutatásra, és az IgG pozitívan nyilvánul meg, akkor valószínűleg egy fertőző betegség vagy az oltás után kialakult immunitásról beszélünk.

Ha az IgA és az IgM nem kerül kimutatásra, és az IgG pozitívan nyilvánul meg, akkor valószínűleg egy fertőző betegség vagy az oltás után kialakult immunitásról beszélünk

Magas IgM-titer és negatív IgG-értékek, IgA esetén megállapítható, hogy akut fertőző betegség van.

Az immunglobulinok eredményeinek egyidejű pozitív értéke - IgA, IgM, IgG jellemző a fennálló krónikus betegség kiújulásának akut fázisára.

Krónikus fertőzés esetén a folyamat csökkenése (remisszió) esetén az ELISA az immunglobulin M (IgM) negatív értékeit mutatja, míg a G (IgG) és az A (IgA) immunglobulinok eredménye pozitív lesz..

Paraziták immunvizsgálata ELISA módszerrel

Az ELISA a paraziták enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálatának rövidítése. Ez magában foglalja az ember immunrendszerének orvosi vizsgálatát. A teszt azon alapul, hogy az antitestek képesek megváltoztatni színüket. Ennek a diagnosztikai módszernek számos pozitív vonása van. Például képes a fertőzés által okozott betegségek sokféleségét kimutatni. Parazita organizmusok által okozott betegségek esetén a leghatékonyabb..

Mit ad a bemutatott technológia: a helminták jelenlétének meghatározása a vérben; más kórokozók keresése a testben; megtudhatja egészségének romlásának okait; a kezelés az így kapott elemzéseken is alapul; figyelemmel kísérheti immunrendszerének állapotát.

Egy másik jó tulajdonság a rákmarkerek nyomon követésének képessége, függetlenül azok eredetétől, de természetesen a testben való jelenlétüktől függően. Ez a teszt alkalmas az emberi reproduktív rendszer állapotának leírására is. Bizonyos fehérjék, hormonok és peptidek jelenléte lehetővé teszi számunkra, hogy megítéljük a partnerben rejlő lehetőségeket a gyermek fogantatása, valamint a leendő magzat becsült minősége szempontjából..

A Giardia vérvizsgálata meglehetősen népszerű gyakorlat a modern orvosok körében. Ezenkívül ez a kutatási módszer kiváló eszköz a biomedicina analitikához és a kvantitatív statisztikákhoz a specifikus antigének szempontjából..

Hogyan alkalmazzák az ELISA módszert?

Nagy hiba lenne összekeverni az ELISA-módszert a széklet szondázásának és az azt követő vizsgálatának módszerével. Ez utóbbit mikroszkópos szintű módszerekkel hajtják végre, amikor a beteg által adott székletmintát veszik, vagy a potenciális betegtől veszik közvetlenül egy egészségügyi intézményben. A mintában megpróbálják kimutatni a helmintikus inváziókat és más komponenseket, amelyek így vagy úgy kapcsolódnak a paraziták létfontosságú aktivitásához. Nem csak a mikroszkopikus parazita organizmusokat vizsgálják, hanem azok maradványait, petéit és lárváit is.

Igaz, ezek összetettebb esetek, így egy ilyen elemzés minősége nagymértékben függ a tesztet végző laboratórium dolgozóitól. A technológia jellemzői és eltérés a régi laboratóriumi kutatásoktól:

  • most a székletminta helyett vért használnak a helminták jelenlétének meghatározására;
  • a minta vizsgálatát a laboratóriumban nagyon gyorsan elvégzik, másnap teljes információt kaphat;
  • a laboratóriumi kutatás költsége olcsó, mivel a teológia nagyon egyszerű;
  • a helminták vérvizsgálata nagy pontosságot ad.

A vizsgálati eredmények relevanciája és hitelessége egyenesen arányos az egészségügyi személyzet képesítésével, a laboratórium technikai felszereltségével, valamint az orvosok körében elkövetett hanyagság vagy figyelmetlenség hiányával. Még a leg figyelmesebb és felelősségteljes laboratóriumi asszisztensnek is óriási nehézségei lesznek, ha a parazita minimális populációban van a testben, vagy ha a tengelykapcsolót azonnal elvégezték a vizsgálat idején..

A vér immunológiai elemzése ELISA-val

Kevesen tudják, hogy mi a vérvizsgálat az emberi immunrendszer szempontjából, mivel ezek a vizsgálatok nem annyira gyakoriak. Rendszerint egy ilyen vérvizsgálat információt nyújt az emberi test immunhiányos vírusáról, és névtelen, mivel a beteg kérésére végezzük.

Alapvetően az ELISA elemzéshez a vizsgált biológiai anyag vér, azonban a cerebrospinalis folyadék, az üvegtest tartalma, a magzatvíz stb..

A mintavételhez üres gyomorból vénából vett vért használnak, amelyből centrifugálással szérumot nyernek a kutatáshoz. Ezenkívül a vérszérum vizsgálata számos nemi úton terjedő betegséget (szifilisz, herpesz, chlamydia), valamint hepatitis, kanyaró, rubeola, mumpsz és toxoplazmózis minden típusát tárhatja fel..

Alapvetően az ELISA elemzéshez a vizsgált biológiai anyag vér, azonban a cerebrospinalis folyadék, az üvegtest tartalma, a magzatvíz stb..

Az immunglobulinok olyan immunmolekulák, amelyek képesek megkötni és semlegesíteni a szervezet legtöbb fertőző ágensét és toxinját. Ebben az esetben az immunglobulinok legfontosabb jellemzője a specifitásuk, vagyis az a képesség, hogy egy adott antigénhez kötődnek. Ezt a tulajdonságot alkalmazzák az immunglobulin vérvizsgálatának elvégzésére..

Az immunglobulinoknak öt típusa van, de a legtöbbet az A, M és G. immunglobulinok vizsgálták. Az M és G immunglobulinok a vérben aktívak. Az A immunglobulinok egyfajta gátat képeznek a nyálkahártya felületén, mivel ott nagy mennyiségben vannak jelen.

Az immunológiai vérvizsgálat lehetővé teszi az immunglobulinok típusának meghatározását, ennek köszönhetően az ELISA nemcsak a betegség diagnosztizálását teszi lehetővé, hanem annak stádiumának meghatározását és a betegség dinamikájának nyomon követését is:

  • a betegség első 2 hetében csak az A immunglobulinok találhatók;
  • a betegség 2. és 3. hetétől az A és M immunglobulinok találhatók a vérben;
  • CC3 4 hétig, az immunglobulin vérvizsgálatát mindhárom típus meghatározza;
  • a gyógyulás során az M immunglobulinok eltűnnek a vérben, az A és G mennyisége 2–4-szer csökken;
  • krónikus folyamat jelenlétében a G immunglobulinok szükségszerűen jelen vannak a vérben, az M immunglobulinok nincsenek, az A immunglobulinok jelen lehetnek vagy hiányozhatnak.

Az immunológiai vérvizsgálat hatóköre ELISA-val

  • A vírusos betegségek diagnosztikája: hepatitis, herpesz, Epstein-Barr vírus, citomegalovírus stb.
  • nemi úton terjedő fertőzések: chlamydia, gonorrhoea, Trichomonas, mycoplasma, ureaplasma;
  • szifilisz; endokrinológia (hormonszint meghatározása);
  • tumor markerek (onkológiai betegségek diagnosztikája); immunológia (immunhiányos diagnosztika);
  • allergológia (allergia diagnosztizálása és kezelése).

A szerológiai vérvizsgálat laboratóriumi vérvizsgálat, amelyet a fertőző betegségek diagnosztizálására és a fertőző folyamat stádiumának meghatározására használnak. A szerológiai reakció az antitestek és antigének kölcsönhatásán alapul.

Az antigének meghatározása a mikroorganizmusok nemzetségének és fajainak meghatározására szolgál. Ezt a kutatási módszert alkalmazzák az urológiában és a venerológiában. A szerológiai vérvizsgálathoz szükséges vért reggel éhgyomorra, üres gyomorra veszik.

A kinevezés és a kimutatható betegségek indikációi ELISA módszerrel

Az ELISA fő biológiai anyaga a vérszérum: a laboratóriumban vértől vesznek vérmintát a betegtől, amelyből tovább eltávolítják az elemzést bonyolító alakú elemeket. Néhány más esetben az elemzés cerebrospinalis folyadékot, magzatvizet, nyálkahártya kenetet stb..

Az eredmények torzulásának elkerülése érdekében ajánlott vért adni éhgyomorra, és két héttel a vizsgálat előtt (ha a krónikus, látens fertőző betegségek diagnosztizálása a cél) abba kell hagyni az antibiotikumok és vírusellenes gyógyszerek szedését. Lehetetlen lefedni az ELISA indikációinak teljes listáját..

Az elemzés leggyakoribb céljai a következők:

  • akut és krónikus fertőző betegségek diagnosztikája: IgM és IgG vírusos hepatitis A, B, C, E, valamint hepatitis B és C antigének; IgG a HIV-hez; Ig M és IgG citomegalovírus fertőzésig; Ig M és IgG Epstein-Barr vírushoz; Ig M és IgG herpesz fertőzésekre; Ig M és IgG toxoplazmózisra;
  • Ig M és IgG kanyaró, rubeola, szalmonellózis, vérhas, kullancs-encephalitis és más betegségek ellen; IgG a parazita betegségek ellen; Ig M és IgG a nemi úton terjedő fertőzésekre; IgG - Helicobacter pylori fertőzés. Az emberi immunitás mutatóinak és egyes autoimmun betegségek markereinek általános értékelése. Onkológiai markerek (tumor nekrózis faktor, prosztata-specifikus antigén, rák-embrionális antigén és mások) azonosítása. A vérszérumban lévő hormonok (progeszteron, prolaktin, tesztoszteron, pajzsmirigy-stimuláló hormon és mások) tartalmának meghatározása.

Az ELISA módszer előnyei

Az ELISA vitathatatlan előnyei a módszer magas érzékenysége és specifikussága. Az érzékenység a célanyag felismerésének képessége, még akkor is, ha koncentrációja a mintában alacsony. A specifitás viszont a diagnózis pontosságát jelenti: ha az eredmény pozitív, ez azt jelenti, hogy pontosan a feltételezett antitestet vagy antigént találták meg, és nem néhányat.

Az ELISA nagyrészt felváltotta a mikrobiológia "aranystandardját" - egy bakteriológiai diagnosztikai módszert, amelynek során a kórokozó azonosításához el kellett különíteni a testtől, majd a táptalajon több napig kémcsőben növesztették a tenyészetet..

Az elemzés folyamata alatt az orvosok kénytelenek voltak "vakon" kezelni a beteget, a betegség tünetei alapján sejtve a mikroorganizmus eredetét. Az IgM meghatározása ELISA segítségével lehetővé teszi a pontos diagnózis felállítását már a betegség első napjaiban.

Az enzim immunoassay magas szintű gyárthatósága minimalizálja az emberi tényező hatását, ami csökkenti a tévedés valószínűségét. A modern laboratóriumokban használt ELISA tesztkészletek és reagensek nagy részét ipari környezetben állítják elő, ami garantálja a pontos eredményt.

Az ELISA módszer hátrányai

Sajnos az ELISA elvégzéséhez tudnia kell, hogy pontosan mire kell figyelnie: az elemzési módszer azt jelenti, hogy az orvos előre feltételezi a betegség természetét. Ezért nincs értelme ilyen vizsgálatot előírni abban a reményben, hogy véletlenül "kitalálja" a diagnózist.

A fertőző betegségek diagnosztizálása esetén az enzim immunoassay nem képes megtalálni a kórokozót és meghatározni annak specifikus tulajdonságait: csak antitestek jelenlétét jelzi a beteg vérében, közvetett módon pedig idegen mikroorganizmus jelenlétét jelzi az emberi testben. Az ELISA rendkívül pontos, de nem olcsó módszer, ezért okosan kell használnia, és képzett orvosnak kell értelmeznie az eredményeket.

Lehetséges ELISA eredmények

Az elemzés tartalmától függően az űrlap tartalmazhat adatokat táblázat formájában, amely felsorolja az összes antitestet vagy antigént, amelyek negatív vagy pozitív reakcióval vannak jelölve, vagy az eredmény mennyiségi értékét (negatív, gyengén pozitív, pozitív vagy élesen pozitív) feltüntetik..

Ma több ezer típusú ELISA tesztrendszert állítanak elő, amelyek lehetővé teszik a specifikus antitestek és antigének kimutatását a legkülönbözőbb patológiákban. Ezért ezt az elemzést szinte az összes orvosi iparban használják. Az ELISA diagnózisa garancia a megfelelő terápia és a betegség hatékony kezelésének kijelölésére..

Ha rendelkezik a szükséges reagensekkel és a laboratórium megfelelő szervezettséggel rendelkezik, akkor a vérvétel után 1-2 napon belül megkapja a teszt eredményét. Bizonyos esetekben, ha sürgősségi reagálásra van szükség, ez az időszak 2-3 órára csökkenthető.

A kiváló minőségű ELISA eredménye egyértelmű ítélet lesz: a kívánt anyag vagy megtalálható, vagy nem található meg a mintában. Ha kvantitatív elemzésről beszélünk, akkor a koncentráció kifejezhető számértékként vagy bizonyos számú "+" jelként (egytől többig).